Tinción H&E
El estándar de oro de la histopatología
Introducción
La tinción Hematoxilina & Eosina (H&E) es, con diferencia, la más utilizada en anatomía patológica mundial. Colorea los núcleos celulares de azul-violeta (hematoxilina) y el citoplasma junto al tejido conjuntivo de rosa-rojo (eosina), proporcionando el contraste morfológico que permite al patólogo evaluar arquitectura, citología y características diagnósticas en prácticamente cualquier tejido. Cancer Diagnostics ofrece hematoxilinas Mayer's y Harris, y eosinas en formulaciones estandarizadas ISO/CLSI con alta reproducibilidad lote a lote.
Puntos clave a considerar
- La calidad de la fijación en formol tamponado neutro es determinante para el resultado final de la H&E.
- El tiempo en hematoxilina varía según la fórmula: Mayer's requiere 5–10 min, Harris 3–5 min.
- El 'viraje' (bluing) con agua corriente o amoniacal convierte el color rojo-marrón en azul-violeta.
- La eosina Y al 0.5–1% en etanol proporciona mayor diferenciación que las soluciones acuosas.
- La deshidratación rápida tras la eosina minimiza la pérdida de coloración citoplasmática.
Protocolo
Procedimiento paso a paso
Desparafinización
Pasar los cortes por xileno en dos baños consecutivos de 5 minutos cada uno. Asegurarse de que no queden restos de parafina, ya que impedirían la entrada de los colorantes.
Rehidratación
Pasar por series de etanol en concentración decreciente: 100% (2 × 3 min) → 95% → 70% → agua destilada. Cada paso debe durar al menos 2 minutos para completar la hidratación progresiva.
Tinción con Hematoxilina
Sumergir en Hematoxilina de Mayer's (5–10 min) o Harris (3–5 min). Lavar con agua corriente hasta que el agua salga clara. La hematoxilina tiñe los núcleos de rojo-marrón en esta etapa.
Diferenciación
Pasar brevemente (2–5 seg) por alcohol ácido al 1% (HCl en etanol 70%) para eliminar exceso de colorante y aumentar la selectividad nuclear. Lavar de inmediato con agua.
Viraje (Bluing)
Sumergir en agua corriente durante 5–10 minutos, o en agua amoniacal al 0.2% durante 30 segundos. El pH alcalino convierte el color rojo-marrón en el azul-violeta característico de los núcleos.
Deshidratación parcial
Pasar por etanol 70% y 95% (1–2 min cada uno) para preparar el tejido para la eosina. La eosina rinde mejor en medio etanólico que en acuoso.
Tinción con Eosina
Sumergir en Eosina Y al 0.5–1% en etanol 95% durante 1–3 minutos según la intensidad deseada. La eosina tiñe citoplasma, fibras colágenas y glóbulos rojos en distintas tonalidades de rosa.
Deshidratación, aclarado y montaje
Deshidratar rápidamente: etanol 95% (2 × 1 min) → etanol 100% (2 × 2 min) → xileno (2 × 3 min). Montar con resina permanente (DPX o similar) y cubrir con lamela. Dejar secar horizontalmente.
Preguntas frecuentes
Dudas técnicas comunes
¿Cuál es la diferencia entre Hematoxilina Mayer's y Harris?
Los núcleos me quedan muy pálidos, ¿qué hago?
¿Con qué frecuencia debo filtrar o renovar la hematoxilina?
¿Pueden usarse estos reactivos en tinción automática?
Software aliado
El caso no termina en la lámina
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Productos
Productos para Tinción H&E
CDIHematoxilinas y EosinasDestacadoHematoxilina de Harris
Hematoxilina de Harris lista para usar, con mordiente de alumbre. Tinción nuclear clásica para H&E de alta calidad. Resultados nítidos y consistentes en rutina diagnóstica.
CDIHematoxilinas y EosinasDestacadoHematoxilina de Mayer
Hematoxilina de Mayer, tinción nuclear progresiva sin necesidad de diferenciación. Ideal para inmunohistoquímica y citología como contratinción de fondo.
CDIHematoxilinas y EosinasEosina Y (Lista para Usar)
Eosina Y alcohólica lista para usar para tinción citoplasmática en el protocolo H&E estándar. Produce una coloración rosa brillante con excelente diferenciación de estructuras.
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