Inmunohistoquímica
Detección precisa de marcadores tumorales
Introducción
La inmunohistoquímica (IHQ) es la técnica diagnóstica que utiliza anticuerpos específicos para detectar y localizar antígenos en cortes de tejido. Indispensable en anatomía patológica oncológica, permite clasificar tumores, establecer el origen de metástasis y guiar decisiones terapéuticas con un nivel de precisión que la morfología sola no puede alcanzar. En Biosupplies CC ofrecemos anticuerpos primarios Bio SB —validados para tejido FFPE— y sistemas de detección Cancer Diagnostics que garantizan resultados reproducibles en cualquier laboratorio venezolano.
Puntos clave a considerar
- La recuperación antigénica (HIER o proteolítica) es el paso más crítico para tejido fijado en formol.
- Siempre incluir controles positivos y negativos en cada corrida para validar el resultado.
- La dilución óptima del anticuerpo primario debe titularse para cada lote y tejido.
- El tiempo de incubación con DAB debe controlarse al microscopio para evitar sobre-revelado.
- Los portaobjetos con carga positiva (silanizados) son esenciales para evitar pérdida de secciones.
Protocolo
Procedimiento paso a paso
Fijación y procesamiento
Fijar el tejido en formol tamponado neutro al 10% (NBF) durante 24–48 horas según el tamaño de la biopsia. Procesar en el procesador automático LUPETEC con ciclos de deshidratación, aclarado e impregnación en parafina.
Corte histológico
Obtener secciones de 3–5 μm con el microtomo LUPETEC. Extender en baño de flotación a 42–44 °C y recoger en portaobjetos silanizados. Secar en estufa a 60 °C por 1 hora como mínimo.
Desparafinización y rehidratación
Pasar los cortes por xileno (2 × 5 min), luego por alcoholes en concentración decreciente: etanol 100% (2 × 3 min), 95% (2 min), 70% (2 min). Finalizar en agua destilada.
Recuperación antigénica
Para la mayoría de anticuerpos Bio SB: recuperación inducida por calor (HIER) en tampón citrato pH 6.0 o EDTA pH 9.0, 95–98 °C durante 20 min. Dejar enfriar 20 min a temperatura ambiente antes de continuar.
Bloqueo de peroxidasa endógena
Incubar con H₂O₂ al 3% en metanol durante 10 min. Lavar 3 × 5 min con PBS o TBS. Este paso elimina la actividad de peroxidasa propia del tejido que generaría fondo.
Bloqueo de fondo inespecífico
Aplicar suero normal (de la especie del anticuerpo secundario) al 5–10% o solución proteica bloqueante durante 20–30 min. No lavar; retirar el exceso y aplicar directamente el anticuerpo primario.
Incubación con anticuerpo primario
Preparar el anticuerpo Bio SB a la dilución indicada en la ficha técnica. Incubar en cámara húmeda a temperatura ambiente (1 h) o a 4 °C durante toda la noche. Lavar 3 × 5 min en PBS/TBS.
Sistema de detección y cromógeno
Aplicar el sistema de detección HRP-polímero y revelar con DAB (diaminobencidina): observar al microscopio hasta obtener color marrón-dorado en el antígeno (generalmente 3–8 min). Detener con agua destilada.
Contratinción y montaje
Contrastar con Hematoxilina de Mayer durante 30–60 segundos. Deshidratar (alcoholes → xileno) y montar con resina permanente. Dejar secar antes de la lectura al microscopio.
Preguntas frecuentes
Dudas técnicas comunes
¿Por qué obtengo fondo intenso en toda la sección?
¿Cuándo usar HIER y cuándo digestión proteolítica?
¿Puedo usar portaobjetos convencionales?
¿Qué incluye el catálogo de anticuerpos Bio SB disponible?
Productos
Productos para Inmunohistoquímica
BSB🔬DestacadoAnticuerpo Monoclonal KI-67 (MIB-1)
Anticuerpo monoclonal anti-KI-67 clon MIB-1 para la evaluación del índice de proliferación celular en tumores. Marcador de proliferación celular esencial en oncología diagnóstica.
BSB🔬DestacadoAnticuerpo Citoqueratina AE1/AE3
Anticuerpo amplio espectro para citoqueratinas de alto y bajo peso molecular. Marcador epitelial universal, fundamental para identificación de carcinomas y metástasis.
BSB🔬DestacadoAnticuerpo Monoclonal p63
Anticuerpo anti-p63 para la identificación de células basales y mioepiteliales. Esencial en el diagnóstico diferencial de carcinoma prostático y patología mamaria.
BSB🔬Anticuerpo Monoclonal CD20
Anticuerpo anti-CD20 para la identificación de linfocitos B y linfomas de células B. Marcador fundamental en la clasificación de linfomas no Hodgkin.
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