Microbiología en Tejidos
Detección histoquímica e IHQ de hongos, bacterias y micobacterias
Introducción
La identificación histológica de microorganismos en tejido es una herramienta diagnóstica de primer orden en patología infecciosa, especialmente en pacientes inmunocomprometidos donde la carga microbiana puede ser masiva y la presentación clínica atípica. A diferencia de los cultivos microbiológicos, el estudio histológico permite correlacionar directamente el microorganismo con la respuesta tisular del huésped, la localización exacta de la infección y el daño tisular asociado. En Venezuela, con una alta prevalencia de infecciones oportunistas (histoplasmosis, criptococosis, tuberculosis pulmonar y extrapulmonar) en pacientes con inmunodeficiencias, estas tinciones son de uso frecuente en los laboratorios de anatomía patológica. Cancer Diagnostics ofrece kits Volume Optimized™ para GMS, PAS, Ziehl-Neelsen modificado y Gram-Twort, todos bajo certificación ISO 13485:2016.
Puntos clave a considerar
- GMS (Gomori Methenamine Silver) es la tinción de elección para todos los hongos en tejido: tiñe las paredes fúngicas de negro brillante independientemente del tipo de hongo o del grado de viabilidad.
- PAS complementa al GMS: distingue levaduras de glucógeno (ambos PAS+) pero es especialmente útil para Candida spp. y Aspergillus donde el patrón morfológico en PAS puede ser más fácil de interpretar que en GMS.
- Ziehl-Neelsen (ZN) o Wade-Fite es la tinción histológica de referencia para micobacterias: las bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) se tiñen de rojo sobre fondo azul.
- El Gram-Twort histológico tiñe bacterias Gram positivas de azul-negro y Gram negativas de rojo, permitiendo orientar el tipo de infección bacteriana en tejido.
- Cryptococcus neoformans tiene una cápsula de mucopolisacárido que se tiñe con Alcian Blue y Mucicarmin (rojo), diferenciándolo de otros hongos encapsulados.
- En todo caso de infección fúngica grave, enviar además tejido para cultivo microbiológico: la histología identifica el grupo (hongo, bacteria, micobacteria) pero el cultivo proporciona la especie y el antibiograma.
Protocolo
Procedimiento paso a paso
Selección de la tinción según el microorganismo sospechado
Hongos (sospecha general): GMS como primera línea. Candida spp. / PAS positivo: PAS o GMS. Criptococosis: Mucicarmin + GMS (la cápsula de mucopolisacárido distingue Cryptococcus de otros hongos). Histoplasma capsulatum (levaduras intracelulares pequeñas): GMS. Aspergillus / Mucor (hifas): GMS, verificar el ángulo de ramificación (45° en Aspergillus, 90° en Mucor). Micobacterias: Ziehl-Neelsen o Wade-Fite (para Mycobacterium leprae). Bacterias: Gram-Twort o Brown-Hopps.
Tinción GMS (Gomori Methenamine Silver) para hongos
Oxidar con ácido crómico al 5% durante 1 hora (o ácido periódico para tejidos delicados). Lavar. Incubar en solución de metenamina plata a 60 °C durante 45–60 min (controlar al microscopio cuando las paredes fúngicas están marrón oscuro). Virar en cloruro de oro al 0.1% durante 2–3 min. Desfij en tiosulfato sódico al 5% durante 2 min. Contrastar con Light Green al 0.2% (30 seg). Las paredes fúngicas quedan negras sobre fondo verde.
Tinción de Ziehl-Neelsen para micobacterias
Cubrir el corte con Fucsina fenicada (Cancer Diagnostics) y calentar suavemente hasta emisión de vapores, sin ebullición, durante 5 min. Lavar con agua. Decolorar con alcohol ácido al 1% hasta que deje de salir fucsina del tejido (usualmente 2–5 min). Lavar. Contrastar con Azul de metileno al 0.5–1% durante 30–60 seg. Lavar, deshidratar y montar. Los BAAR se tiñen de rojo brillante sobre fondo azul.
Tinción Mucicarmin para Cryptococcus
Preparar hematoxilina Mayer → virar → Mucicarmin de Mayer (Cancer Diagnostics) durante 30 min. Lavar. Contrastar con negro de Metanilo si se desea. La cápsula de Cryptococcus se tiñe de rojo rosado brillante (mucopolisacárido ácido). Esta tinción distingue Cryptococcus de Histoplasma y otros hongos que no tienen cápsula mucicarminofílica.
Interpretación morfológica de los hongos
Candida spp.: levaduras ovales (3–6 μm) con pseudohifas, GMS+/PAS+. Aspergillus: hifas septadas de 3–6 μm de diámetro, ramificación en ángulo agudo (45°), GMS+. Mucor/Rhizopus: hifas anchas (6–15 μm), aseptadas o escasamente septadas, ramificación en ángulo recto (90°), GMS+ — morfología caractarística de mucormicosis. Histoplasma: levaduras pequeñas (2–4 μm) intracelulares en macrófagos, GMS+. Cryptococcus: levaduras esféricas (5–20 μm) con halo capsular, GMS+ y Mucicarmin+.
IHQ complementaria en infecciones
Para casos difíciles o inusuales: Anti-Aspergillus, Anti-Candida, Anti-CMV, Anti-HSV, Anti-Toxoplasma, Anti-Helicobacter pylori y otros anticuerpos específicos están disponibles en el catálogo Bio SB. La IHQ permite detectar microorganismos en cortes de rutina cuando la morfología no es diagnóstica o cuando el agente es escaso. Anti-CMV (citomegalovirus) es especialmente útil en colitis del inmunocomprometido, donde las células citomegálicas pueden confundirse con células tumorales.
Preguntas frecuentes
Dudas técnicas comunes
¿Cuándo pedir GMS vs PAS para hongos?
¿Puedo diagnosticar tuberculosis solo con el Ziehl-Neelsen?
¿Cómo se diferencia Aspergillus de Mucor en la histología?
¿La IHQ puede detectar virus en tejido?
Productos
Productos para Microbiología en Tejidos
CDI🧪DestacadoKit Tinción Amiloide (Rojo Congo), Volumen Optimizado
Kit completo para la detección de depósitos de amiloide en tejido, utilizando la tinción Rojo Congo con volumen optimizado para mayor eficiencia y menor desperdicio de reactivos.
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Kit PAS optimizado para la detección de polisacáridos, mucinas y glucógeno en tejidos. Protocolo modificado de Lillie con resultados consistentes y reproducibles.
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Combinación de Alcian Blue y PAS para la diferenciación simultánea de mucinas neutras (magenta) y ácidas (azul). Esencial en el diagnóstico gastrointestinal y pulmonar.
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